推薦一種新型的、正在申請專利的R-通用緩沖液,用于在福爾馬林固定的石蠟包埋切片的抗原修復。它是專門針對2100型抗原修復鍋開發(fā)的,在英國的病理實驗室進行了完全的測試,現(xiàn)在適用于所有抗原修復鍋用戶和其它使用常規(guī)組織材料的研究人員。
熱誘導的抗原修復過程非常復雜,目前并不是很清楚每一反應。首先,加熱(微波或高壓鍋,或僅僅是一個水?。е碌鞍踪|(zhì)的變性,這被認為會導致更好地暴露在蛋白質(zhì)上的線性肽表位。然而,如果抗原修復緩沖液的pH不“適合”特定的個體抗體,所產(chǎn)生的染色將遠遠超出預期(可能觀察到完全不同的模式,或根本沒有染色),通常是非特異性。
在緩沖液中加入一些蛋白質(zhì)變性劑(如SDS或胍苷,如我們之前在U緩沖液中使用的)可能會提高某些抗體的反應性,但可能會破壞其他抗體的表位。
在固定和干燥過程中,鈣++離子在組織中沉淀,影響染色;用于固定的福爾馬林在組織中的蛋白質(zhì)和其他分子之間產(chǎn)生了大量的交聯(lián)。組織中甲醛的主要反應是與賴氨酸ε-氨基(考慮到是可逆的);二次反應在氨基殘基、氨基酸和DNA之間形成交聯(lián),這些反應被認為是不可逆的。有些人使用檸檬酸酐進行抗原表位修復,是基于它與修飾ε-氨基的可逆反應,并確實改善了抗原的暴露。不幸的是,檸檬酸酐是有毒。
我們已經(jīng)實現(xiàn)了一個優(yōu)秀的解決方案,抗原修復鍋和嶄新專用的通用緩沖液。特別設(shè)計的冷熱程序從一開始就是為了重塑變性表位的最佳結(jié)果(允許它們適當?shù)闹匦抡郫B);新的緩沖液成分可去除甲醛形成的蛋白質(zhì)交聯(lián)和去除Ca++,同時沒有使用檸檬酸酐等有毒物質(zhì)。
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抗原修復通用緩沖液R-Universal,10x stock |
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